Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中慢慢扩展

从第一次显现肝中央线粒纤自身免疫到显现1型号哮喘外科患者的重大突破率在幼儿以前就有良好的阐述，多个肝中央线粒纤自身免疫感染性的幼儿里面有70%在血清转换成后10年内中风哮喘，而随访15年的幼儿这一分之一增高到84%。相比之下，占外科1型号哮喘一半以上的型号1型号哮喘的复发机制还从未得不到充分的研究课题。

越来越多的人开始采用分期控制系统来定义1型号哮喘的重大突破：生殖在显现多种肝中央线粒纤自身免疫时重回第1收尾，显现血压诱发时重回第2收尾，显现患者时重回第3收尾。一些多发肝中央线粒纤自身免疫感染性的生殖，在1期和2期，重大突破较太快，并的发展为复发的1型号哮喘。我们之前阐述了一一组在首次检验到多种肝中央线粒纤自身免疫采样后据估计10年无哮喘的极太快重大突破者，这一组患儿人数少，但有所不同之处非常明确。随后，我们辨认出肝中央线粒纤自身抗原特异性CD8+T中央线粒纤反不应在重大突破快速的患儿里面基本不存在，但在全面性复发和长期存在的哮喘患儿里面很容易检验到。这可能暗示，与重大突破患儿相比，这些患儿神经性反不应的抑制增强。

早期研究课题暗示，尽管抑制性T中央线粒纤(Treg)数量正常，但哮喘患儿存在一些功能原因，其里面包含对IL-2的反不应能力降低。此外，哮喘患儿里面的效不应CD4+T中央线粒纤可能对抑制非常具抵抗性，表现为效不应T中央线粒纤的抑制作用弱化，自然环境显现成的Treg和纤外显现成的可借Treg，以及抗原经历的CD4+T中央线粒纤里面IL-2反不应弱化。本研究课题的借此是阐述了CD4+抑制性T中央线粒纤(Treg)在一个大极快速重大突破者里面的有所不同之处，他们的平均平均年龄为43岁(31-72岁)，随访整整为18-32年。

方法：BOX研究课题是一项以这群人依此的纵向研究课题，在21岁以下复发的患儿亲属里面安全检查1型号哮喘的危险环境因素。我们之前阐述了长期快速重大突破者的有所不同之处，他们保持多重肝中央线粒纤自身免疫感染性多达10年，但从未显现哮喘的外科患者，太快性或非外阴神经性。随后，10名继续保持无哮喘并愿意提供大量血液采样的快速重大突破者纳入T和B中央线粒纤功能深入研究。在目前的研究课题里面，8名太快重大突破者(SP一组)，里面位平均年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁中间的肝中央线粒纤自身免疫感染性。所有的自发性都西北面1型号哮喘重大突破的1期，尽管一些人随后夺去了肝中央线粒纤自身免疫对某些抗原的感染性反不应，然而，一名患儿已经西北面2期据估计6年，但从未显现外科患者，一名患儿被复发为哮喘，该人脑72岁，在采集实验采样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在统计学里面对该遗传物质顺利进行了单独审核子。分离外周血单个核子中央线粒纤(PBMCs)，采用多参数流式中央线粒纤练成和T中央线粒纤抑制作用试验审核子遗传物质里面Treg的频带、遗传号和功能。采用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴别、表征和复成)顺利进行无全权负责聚类深入研究，审核子Treg遗传号。

结果：与肥胖遗传物质相比，来自太快重大突破纤的知觉CD4+T中央线粒纤的全权负责聚类推断，诱导的知觉CD4+ Treg频带增高，与免疫抑制可借的TNFR相关蛋白(GITR)表达成来增高有关。一名HbA1c升高的患儿与重大突破快速者和最简单的对照一组相比，Treg小曲有所有所不同。功能于数，与肥胖遗传物质相比，来自快速重大突破纤的Treg内皮细胞的CD4+效不应T中央线粒纤抑制作用轻微损害。表现为对效不应CD4+T中央线粒纤CD25和CD134表达成来的抑制作用增高。

示意图1 了解的遗传号深入研究推断，CD4+Treg甲型号在太快重大突破函数调用里面增高。由FlowSOM作用于的Treg室，聚集在来自所有遗传物质的来时CD4+CD45RA -中央线粒纤上。根据记号物表达成来鉴别成10个元簇:知觉T中央线粒纤_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;知觉T cell_4;CD49b知觉T中央线粒纤;HLA-DR + GITR +知觉T中央线粒纤;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)采用9个有所不同Treg记号作用于的10个元簇的MST。每个路由表都是一个一个大(100个一个大)，非常大的元一个大(10个元一个大)在路由表一组外围上色。每个路由表里面的饼示意图指成单个记号的表达成来级别。(b)每个元聚类的热示意图，以推断整纤记号表达成来。(c, d)为HD一组(c)和SP一组(d)作用于示意图，以及FlowSOM比对的每个元簇的覆盖物。(e-l)相对来说重元素为每个metacluster筒中央线示意图(重元素> 0.05%)确切为HD和SP一组:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +知觉T中央线粒纤(h)、知觉T cell_1(i),知觉T cell_2 (j),知觉T cell_3 (k) n d CD49b知觉T中央线粒纤(l)。蓝色白点都是**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon以此类推标记秩检验。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 采用CITRUS的深入研究表明号证实，Treg频带的增高是重大突破快速的标志。AO相关联(a - f)和柑橘深入研究(g-k)比较SP自发性和最简单的HD自发性在CD4+CD45RA−T中央线粒纤上的相异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会群纤的都是性示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3非金属，然后通过HLA-DR和GITR表达成来顺利进行分离，各种类型FlowSOM社会群纤。(b) HD(外缘)和SP(布氏)一组以及遗传物质SP 606(蓝色)里面CD25+ cd127的频带汇总示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+相关联同构的筒中央线示意图;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)木瓜簇双螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表达成来高强度着色，箭头突成的簇被比对为SP和HD函数调用中间的有所不同。(j)筒中央线示意图推断了在SP(布氏)和HD(灰点)一组里面，CITRUS知觉Treg_3和Treg_4的相对来说重元素(分之一)。(k)直方示意图推断每个簇的遗传号(粉红色)和Treg记号相对来说表达成来与历史背景表达成来(浅蓝色);上列，存储器Treg_3;下面一行，存储器Treg_4。历史背景与所有其他簇里面记号的表达成来有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon以此类推标记秩检验

示意图3 与肥胖献血者相比，重大突破快速者知觉treg的GITR增高。每个知觉CD4+T中央线粒纤元簇(知觉T中央线粒纤_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;CD49b +知觉T中央线粒纤;HLA-DR + GITR +知觉T中央线粒纤;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检验每个表达成来记号的叠加。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的表达成来热示意图(sp606不包含在内)。(c,d)知觉Treg_4元簇里面所有HD(黄褐色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(蓝色)的FlowSOM GITR表达成来串联，推断直方示意图(c)和汇总示意图(d)。Wilcoxon以此类推标记秩和检验，p< 0.07(蓝色)所有遗传物质包含，p< 0.05(浅蓝色)遗传物质SP 606和最简单的HD不包含在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR表达成来，从AO相关联，从所有HD(黄褐色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(蓝色)串联，推断直方示意图(e)和汇总示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon以此类推标记秩检验

示意图4 来自快速重大突破的CD4+ treg中央线粒纤控制效不应CD4+T中央线粒纤的能力降低。SP一组用浅蓝色的中央线和白点指成，HD一组用黄色的中央线和白点指成，蓝色的中央线/白点指成遗传物质sp606。采用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T中央线粒纤顺利进行分选。CD4+CD25−(不转发者)被记号为CFSE, Treg按检视的分之一起始。用抗CD3 /28微珠再生中央线粒纤，养成3当晚顺利进行流式中央线粒纤练成检验。(a-d)与CD4+不转发者相对来说不应的treg养成(自纤)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD不转发者养成。(a,b,f) CFSE再生(a,e)和CFSE抑制作用百份(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用百份。采用感染性对照(诱导的响不应中央线粒纤不含treg)算出抑制作用百份。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

示意图5 效不应CD4+T中央线粒纤对快速重大突破的T中央线粒纤再生的抑制作用非常引人注意。SP一组用浅蓝色的中央线和白点指成，HD一组用黄色的中央线和白点指成，蓝色的中央线/白点指成遗传物质sp606。采用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T中央线粒纤顺利进行分选。CD4+CD25−(不转发者)被cfsel记号，treg按检视的分之一起始。用抗CD3 /28微珠再生中央线粒纤，养成3当晚顺利进行流式中央线粒纤练成(CD25反染)和巨噬中央线粒纤深入研究。HD Treg与HD、SP或sp606不转发者共同养成。(a,b) CFSE再生(a)和CFSE抑制作用百份(b)。(c,d) CD25抑制作用百份(c)和CD134抑制作用百份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共养成里面的表达成来。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们证明了的结论是，来自快速重大突破子的再生知觉CD4+Treg在GITR表达成来里面得不到了扩展和非常丰富，强调了进一步研究课题Treg在1型号哮喘风险生殖里面的异质性的必要性。

原文成处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28